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Développement et validation in vitro et in vivo d’un (...)

La recombinase Cre permet l’excision ou l’inversion d’une séquence génomique flanquée de deux séquences de 34 pb, nommées loxP. Cette propriété permet de générer des animaux dans lesquels l’expression ou l’inactivation d’un gène peut être contrôlée par l’expression de la recombinase. Un des défis actuels est de pouvoir contrôler finement le domaine spatio-temporel d’action de la recombinase afin d’étudier le rôle des gènes dans la fenêtre d’intérêt, en s’affranchissant notamment des effets délétères d’une recombinaison précoce. Nous avons développé une nouvelle approche de régulation de l’activité Cre basée sur un concept de complémentation inductible. Ce nouveau système, dénommé DiCre pour « Dimerizable Cre », est composé de deux fragments inactifs de Cre fusionnés aux deux protéines FRB et FKBP. Ces dernières ont la propriété d’hétérodimériser avec la rapamycine, une petite molécule liposoluble. L’apport de celle-ci dans le système conduit ainsi à l’association des deux fragments de Cre et à une restauration de l’activité. Nous avons montré que DiCre est fonctionnel in vitro dans des cellules de mammifères, et qu’il permet d’obtenir à la fois un excellent niveau de répression à l’état basal et un très fort niveau d’activation après induction par la rapamycine ou d’un analogue non toxique Nous avons, par la suite, créé et caractérisé une lignée murine DiCre par knock-in au locus Rosa26. Malgré l’impossibilité d’induire la recombinaison au cours du développement embryonnaire, nous avons montré que de DiCre était inductible et efficace dans certains tissus adultes tout en permettant une répression parfaite, c’est à dire une absence totale de recombinaison, à l’état basal.

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